· polyacrylamidegel kudu dening monomer acrylamide, bahan wiwitan polimerisasi, katalis, lan sisih tengen uyah lan buffer dicampur bebarengan.
· akrilamidalan BIS (N, N '- methylene double acrylamide) minangka matriks gel wangun monomer.
· amonium persulfate miwiti proses polimerisasi adhesive. Formulasi lem mbutuhake 10% larutan amonium persulfate sing disiapake ing banyu. Umume informasi kasebut nuduhake kabutuhan kanggo nggunakake aktif. Nanging, solusi 10% bisa diselehake ing 4 ℃ kanggo sawetara minggu tanpa mundhut saka kegiatan. Gawe nganti 10 ml lan dibuwang nalika lem gagal ngumpulake.
Tip: Persentase sakaakrilamidaing lim urutan lan lim protein ora padha. Yen nggunakake acrylamide premade: solusi BIS, priksa manawa sampeyan entuk botol sing pas.
· TEMED (N, N, N ', N '- tetramethyl ethylenediamine) minangka katalis, ing botol coklat, diselehake ing kulkas. Tambah sakdurunge pour lem.
· elektroforesis polyacrylamide kaca digunakake ing elektroforesis kudu sakabeheng sadurunge lan sawise saben wektu. Sawise elektroforesis, wisuh nganggo sikat alus lan kain ing banyu sabun panas, mbilas nganggo banyu suling lan ngadeg nganti garing.
· Kelembapan lan bledug bisa nyebabake polimer kothong. Sadurunge elektroforesis, ngresiki piring kaca nganggo pembersih kaca lan ngilangke nganggo sikat alus. Cuci nganggo banyu suling lan garing sak tenane nganggo lap kertas. Cuci nganggo etanol 70% sadurunge ngusap nganggo kertas mbantu ngresiki lan nyepetake pangatusan. Tambahake conto acrylamide kanthi berturut-turut: BIS, banyu, larutan buffer, amonium persulfate, TEMED. Goyangake kanthi apik lan langsung pour.
Sampeyan ora perlu degass polyacrylamide sadurunge polimerisasi. (Acrylamide digunakake kanggo diselehake ing vakum kanggo mbusak gelembung amarga oksigen nyegah polimerisasi.)
Tip sampel titik lem horisontal.
· sijine Piece saka kertas ireng ing kothak ngisor, latar mburi ireng kanggo nggawe sawetara bolongan sampel kanggo ndeleng luwih cetha.
· tank lim kapenuhan buffer, mung liwat colloid.
· Yen pinggiran ana cahya, nguripake lampu, supaya cahya mancorong koloid. Tarik sampel menyang pipette.
· nggunakake piranti pipetting otomatis.
· ing 10-200 mu 1 Cairan obah titik bisa digunakake ing paling saka TCTerms ing sampel. Kanggo bolongan sampel sing cilik banget (kurang saka 10μ1), sirah pipette dawa sing digunakake kanggo lem urutan luwih trep.
· pipetting mung nyemplungaken ing sampel, inhaling alon obah adi. Sampel bisa katon lengket karo gliserin, lan pompa kanthi cepet bisa narik gelembung udara menyang sirah pipette.
· conto sawise inhaling sirah pipetting, bakal mindhah sirah adi alon-alon ing pinggir pipa utawa kertas wiping nyedhot sirah Cairan njaba tetesan. Ati-ati supaya ora nyedhot sampel.
Selehake sampel menyang bolongan sampel
· piranti pipetting kanggo njaga meksa sethitik, nggawe conto rada mindhah sirah Cairan kebanjiran.
· sirah pipetting dipasang menyang buffer, rada luwih dhuwur tinimbang bolongan titik, njaga tekanan positif. Pucuk pipette bisa dilebokake ing bolongan cilik.
· alon lan ajeg conto metu. Tip pipette diselehake ing ndhuwur bolongan sampel titik, lan sampel bakal tenggelam ing bolongan kasebut. Ayo sampel nglelebke kanggo ngisi bolongan sampel tinimbang nyurung.
· yen tetes pungkasan sampel karo sirah Cairan, Cairan bakal pindhah menyang sikil kapindho, alon-alon mundhakaken gerakan Cairan, pindhah metu saka buffer
Kepiye cara sampling lem vertikal?
· bolongan sampel titik lim vertikal kawangun antarane rong bagéyan kaca. Ing lem sing tipis banget, sirah pipette ora bisa dilebokake ing antarane rong piring kaca. Watch gliserin! Sijine sirah pipette liwat bolongan sampel lan sampel bakal sink menyang bolongan.
· titik sampel sadurunge, dadi manawa kanggo nyelehake titik vertikal polypropylene acyl gel sampel bolongan wis rinsed resik. Cuci acrylamide sing ora dipolimerisasi lan banyu sing katon ing ngisor bolongan sampel. Banyu bisa nggawe bolongan sampel luwih cilik. Gunakake jarum suntik 25ml utawa 50ml lan jarum 18-gauge. Tuangake buffer elektroforesis lan siram bolongan sampel kanthi teliti.
· bisa dadi angel kanggo ndeleng bolongan sampel, nanging ing wektu sing padha, liyane gampang. Yen ana keluwihan bolongan, buffer sampel bisa dites karo bromophenol biru.
Wektu kirim: Mar-31-2023